VAMS® para medir Feninalanina em um ensaio clínico de Fenilcetonúria de fase 2
por Allcrom
Um artigo de Lan Gao e outros pesquisadores, na PTC Therapeutics nos Estados Unidos publicado na edição de junho de 2023 da Clinical Biochemistry, descreveu uma validação e ensaio clínico de fase 2 de um método VAMS® para medir a Fenilalanina.
O artigo é intitulado “Validação e aplicação do método de microamostragem volumétrica de sangue seco por microamostragem absorvente (VAMS®) para dosagem de Fenilalanina em pacientes com Fenilcetonúria.” Os pesquisadores aplicaram dispositivos de microamostragem Mitra® baseados na Tecnologia VAMS® para coletar amostras de sangue por punção digital para seu estudo.
O estudo mostrou excelente concordância entre sangue seco capilar e plasma para Feninalanina em uma coorte de 24 pacientes (n=24).
Os pesquisadores foram capazes de relatar que os resultados concordantes foram obtidos usando VAMS® e métodos de utilização de plasma, o que demonstrou que “VAMS® é um método confiável para aplicações clínicas para monitorar Feninalanina no sangue para pacientes com Fenilcetonúria”.
Antecedentes sobre Fenilcetonúria (PKU)
A PKU é um distúrbio autossômico recessivo que afeta tanto o desenvolvimento físico quanto o neurodesenvolvimento, levando à morte prematura. Do ponto de vista bioquímico, o distúrbio genético leva a uma deficiência em uma Enzima chamada Fenilalanina Hidroxilase, que funciona para catalisar a conversão de Fenilalanina (Phe) em Tirosina. Na ausência de Fenilalanina Hidroxilase, o Aminoácido é convertido na toxina cerebral, Ácido Fenilpirúvico pela ação de uma Transaminase.
Diagnóstico de PKU
Até a década de 1950, a maneira de diagnosticar a PKU era medir o acúmulo de Ácido Fenilpirúvico na urina reagindo-o com Cloreto Férrico. Embora este teste tenha sido preciso, não foi sensível o suficiente para detectar todos os casos a tempo da intervenção precoce. Por esse motivo, danos cerebrais irreversíveis geralmente ocorriam naqueles que sofriam da doença.
As primeiras abordagens para diagnosticar a PKU mudaram com Robert Guthrie, MD, PhD. Ele era médico e cientista pesquisador que obteve seu doutorado na Universidade de Minnesota. Seu foco inicial de pesquisa foi em ensaios de inibição bacteriana para estudar a sensibilidade aos antibióticos.
Em 1947, seu segundo filho, John, nasceu com um distúrbio do neurodesenvolvimento e, apesar de seus melhores esforços, o Dr. Guthrie não conseguiu encontrar um diagnóstico ou tratamento para seu filho. Em 1957, sua sobrinha de 15 meses foi diagnosticada com a condição de desenvolvimento chamada Fenilcetonúria (PKU), o que levou o Dr. Guthrie a pesquisar a PKU.
Em 1958, depois de assistir a uma palestra do Dr. Robert Warner sobre crianças com distúrbios do desenvolvimento, no Centro de Reabilitação Infantil do Hospital Infantil de Buffalo, o Dr. Guthrie foi trabalhar no Hospital Infantil de Buffalo com um ensaio mais sensível para diagnosticar PKU. O Dr. Guthrie acreditava que o diagnóstico precoce permitiria uma intervenção mais rápida usando a inibição bacteriana, sua área de especialização. Na época, o único tratamento para PKU era colocar os pacientes em uma dieta baixa em Fenilalanina (Phe), mas isso só funcionava se o dano fisiológico ainda não tivesse ocorrido.
Em 1960, o trabalho do Dr. Guthrie levou a um ensaio de triagem de PKU usando gota de sangue seco (DBS), que envolveu a coleta de amostras de sangue capilar seco em discos de papel-filtro de pacientes com PKU.
O sangue enriquecido com Fenilalanina atuou para superar o antagonista de Phe B-2-tienilalanina impregnado em placas de Ágar cultivadas com Bacillus Subtilis. Isso levou a florações bacterianas ao redor dos discos de pacientes com PKU.
Em 1961, o Dr. Guthrie começou a realizar testes de rotina de sangue seco neonatal para PKU. Este foi o início do que desde então se tornou um protocolo de triagem neonatal altamente bem-sucedido em hospitais, onde até 50 condições podem ser triadas em amostras de sangue para erros inatos do metabolismo.
Novos tratamentos para PKU
Destaques da Validação do Método e Ensaio Clínico
- Um método LC-MS/MS foi totalmente validado de acordo com as diretrizes de validação do método bioanalítico da Food and Drug Administration (FDA) e da Agência Europeia de Medicamentos (EMA). Alguns dos destaques:
- Devido à ocorrência natural de Phe no sangue, o grupo de pesquisa usou um substituto estável de Phe (2,3-13C2,15N-Fenilalanina) e uma molécula relacionada (13C9,15N-Fenilalanina) para o padrão interno.
- O Phe foi estável em Dispositivos Mitra® por 232 dias em temperatura ambiente e 15 dias a 45°C
- Em termos de percentual (%) do efeito de Hematócrito, Viés e Coeficiente de Variação, as amostras estavam dentro de ±15%.
- Os pacientes receberam Dicloridrato de Sapropterina (20 mg/kg/dia) ou PTC923 [Sepiapterina] (20 ou 60 mg/kg/dia).
- Múltiplas amostras pareadas (plasma venoso e VAMS® de sangue capilar) foram coletadas (n=312, 247) com apenas uma taxa de rejeição de 4,81%.
- Destas, 15 amostras foram subamostradas (coletadas com volume inferior) e 9 foram sobreamostradas (coletadas com volume superior).
- As amostras de volume superior ainda estavam dentro de -14,6% a 6% das amostras de plasma.
- Quando estes foram identificados, a equipe do local foi treinada novamente nas técnicas corretas de coleta de amostras e as demais amostras foram coletadas corretamente.
- Ao comparar com o método de plasma padrão, a análise de regressão Passing-Bablok para VAMS® foi 9587* Método Plasma + 0,6359 (IC 95% para inclinação 0,9370 a 0,9790 e intercepto -5,804 a 8,469).
- O teste de viés de Bland-Altman (baseado na diferença proporcional) mostrou que os dados estavam uniformemente distribuídos acima e abaixo da média (-0,04246; IC 95% -0,05904 a -0,02589
- A pequena diferença negativa observada a partir do Bland-Altman (-4,25%) ePassing-Bablok (-4,49%) em Dispositivos Mitra® estava dentro do que era aceitável para haver uma mudança clínica. Além disso, o grupo comentou que, como não havia um método padrão para medir Phe no sangue, esses valores de “viés” refletiam a diferença entre os dois métodos, em vez de um método ser mais preciso do que o outro.
Observações Finais dos Autores do Estudo
- O ensaio de sangue seco VAMS® foi desenvolvido para Phe seguindo as diretrizes regulatórias.
- As amostras podem ser coletadas em casa de acordo com as Boas Práticas Clínicas.
- A taxa de aceitação da amostra foi muito melhor do que a relatada anteriormente.
- A diferença entre a amostragem de plasma e VAMS® foi inferior a 5%.
- Dados de amostras de VAMS® mostraram que a redução de Phe foi significativamente maior para aqueles que tomaram PTC923 60 mg/kg/dia em comparação com o Dicloridrato de Sapropterina 20 mg/kg/dia.
Os Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS® estão atualmente sendo usados em um ensaio clínico de fase 3 que estuda o PTC923 e será usado em estudos futuros.
Comentários
- O ensaio de sangue seco VAMS® foi desenvolvido para Phe seguindo as diretrizes regulatórias.
- As amostras podem ser coletadas em casa de acordo com as Boas Práticas Clínicas.
- A taxa de aceitação da amostra foi muito melhor do que a relatada anteriormente.
- A diferença entre a amostragem de plasma e VAMS® foi inferior a 5%.
- Dados de amostras de VAMS® mostraram que a redução de Phe foi significativamente maior para aqueles que tomaram PTC923 60 mg/kg/dia em comparação com o Dicloridrato de Sapropterina 20 mg/kg/dia.
Os Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS® estão atualmente sendo usados em um ensaio clínico de fase 3 que estuda o PTC923 e será usado em estudos futuros.
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