Microamostragem de Saliva para Monitorar o Fluido Oral para Epilepsia
por Allcrom
Um artigo de Valentina Franco e outros pesquisadores, em várias instituições na Itália e na Noruega, publicado na edição de julho de 2023 da Pharmaceutics descreveu um método validado para medir um medicamento antiepiléptico a partir de fluido oral em amostras de saliva coletadas usando dispositivos de microamostragem Mitra ® baseados na Tecnologia VAMS ®. Seu artigo foi intitulado “Monitoramento salivar terapêutico de Perampanel em pacientes com epilepsia usando técnica de microamostragem volumétrica absorvente.”
Seu estudo demonstrou que Perampanel poderia ser monitorado de forma confiável a partir de amostras secas de saliva coletadas automaticamente por pacientes em casa. Os autores do estudo concluíram que o método apresentou desempenhos bioanalíticos adequados e “possui grande potencial como estratégia alternativa para apoiar o monitoramento terapêutico medicamentoso (TDM) domiciliar em pacientes com epilepsia tratados com Perampanel de acordo com a simplicidade da coleta de amostras”.
Epilepsia e Perampanel
De acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS), cerca de 50 milhões de pessoas em todo o mundo vivem com epilepsia, com 80% vivendo em países de baixa e média renda. As causas deste distúrbio neurológico podem incluir problemas durante o parto, traumatismo craniano, infecção do cérebro, anormalidades genéticas, acidente vascular cerebral e tumores cerebrais. Pensa-se que 25% dos casos de epilepsia poderiam ser evitados tomando medidas para prevenir algumas das causas conhecidas, como lesões na cabeça, cuidados perinatais adequados, medicamentos para reduzir a febre, reduzir os fatores de risco em torno do acidente vascular cerebral e eliminação de parasitas em áreas tropicais, o que pode levar a infecções cerebrais, como a neurocisticercose.
Pensa-se que quase 70% das pessoas que vivem com epilepsia poderiam estar livres de convulsões se tivessem acesso a medicamentos anticonvulsivos apropriados. Existem cerca de 30 medicamentos antiepilépticos atualmente no mercado, um dos quais é o Perampanel (PER), um medicamento de suspensão oral que é vendido sob diferentes marcas. A ação ou mecanismo de PER não é compreendido totalmente; no entanto, sabe-se que atua como um antagonista seletivo do receptor de Glutamato de Ácido Alfa-amino-3-hidroxi-5-metil-4-isoxazolpropiônico pós-sináptico (AMPA). Sabe-se também que o Glutamato é um importante neurotransmissor excitatório. A hipótese de trabalho atual é que o antagonismo do receptor AMPA pode reduzir a superestimulação do AMPA, inibindo assim as convulsões.
Na Europa e nos Estados Unidos, o PER é aprovado como antiepiléptico para adultos e crianças com mais de 12 anos, embora os tipos de convulsões para os quais o medicamento é aprovado difiram com a idade do indivíduo. Ensaios clínicos usando voluntários saudáveis mostraram que a meia-vida de eliminação foi de 53-136 horas, no entanto, a taxa de depuração é afetada por certas interações medicamentosas. Por exemplo, se PER for coadministrado com outro medicamento para epilepsia, Carbamazepina, então a taxa de depuração total de PER aumenta três vezes. Efeitos semelhantes também são observados com Fenitoína ou Oxcarbazepina. Como resultado, é importante monitorar terapeuticamente o PER em indivíduos, especialmente aqueles em uso paralelo de certas medicações.
O artigo de Valentina Franco, em parceria com outros pesquisadores, faz referência a dois estudos publicados anteriormente, onde afirma-se que o monitoramento terapêutico de drogas (TDM) do PER pode ser benéfico.
Microsamostragem salivar para TDM
Para a maioria dos monitoramentos de drogas terapêuticas, o plasma é a matriz padrão usada e a punção venosa é o meio padrão de coletar as amostras de sangue necessárias. O fluido oral (saliva), por outro lado, apresenta uma matriz alternativa potencial intrigante para o TDM. A principal vantagem da saliva é que o método de coleta é não invasivo, o que é benéfico para coortes com fobia de agulha e vulneráveis, como crianças pequenas. Além disso, o fluido oral pode ser facilmente coletado por pessoal não treinado.
No entanto, o uso de saliva para monitoramento terapêutico não é isento de desafios. Um desafio é que os analitos às vezes estão em uma concentração mais baixa nesta matriz, tornando a detecção e a quantificação desafiadoras. Outro desafio envolve correlacionar valores equivalentes de soro ou plasma aos encontrados na saliva, embora os autores tenham feito referência a outro estudo em que a saliva foi correlacionada com sucesso com o plasma para medicamentos anticonvulsivantes. Tal como acontece com todas as matrizes úmidas, também pode haver preocupações relativas à estabilidade do composto.
Para abordar alguns desses desafios, Franco e outros pesquisadores consideraram o uso da coleta remota através de microamostragem volumétrica absorvente com Dispositivos Mitra ®.
As vantagens desta tecnologia de microamostragem remota são que ela permite a amostragem domiciliar e é projetada para coletar e armazenar amostras secas que podem ser enviadas pelo serviço de postagem padrão em temperatura ambiente com boa estabilidade.
Os autores do estudo acreditavam que essa abordagem era adequada para amostragem conveniente, remota e confiável no TDM. Eles foram ainda encorajados por estudos de caso na literatura que mostraram que a coleta de sangue seco usando microamostragem volumétrica absorvente foi usada com sucesso para pesquisa antiepiléptica. Eles também aprenderam que a técnica VAMS® havia sido usada com sucesso para coleta de fluidos alternativos, incluindo urina e saliva.
Com isso em mente, Franco e outros pesquisadores embarcaram em seu estudo para validar um ensaio de VAMS® salivar seco para TDM de PER.
Conquistas do estudo salivar de PER
Os pesquisadores conduziram uma validação bem-sucedida do monitoramento salivar de PER em microamostras de saliva usando a tecnologia VAMS® e LC-MS/MS de acordo com a Diretriz da Agência Europeia de Medicamentos sobre Validação de Método Bioanalítico.
Os destaques do estudo incluem:
- A precisão inter e intra-dia foi de 12,1% e a precisão estava dentro de 85,6-103,2%.
- As recuperações médias de extração dos valores de Limite de Quantificação (LQ) e Controle de Qualidade baixo, médio e alto foram: 97,2%, 81,3%, 98,7 e 96,5%.
- A estabilidade comprovada foi observada para amostras armazenadas em temperatura ambiente durante 72 horas, -20°C durante 1 mês, bem como 3 ciclos de congelamento-descongelamento.
- Não foram observados picos de interferência de 6 voluntários saudáveis ou de pacientes tomando os seguintes medicamentos anticonvulsivantes concomitantes: Canabidiol, Carbamazepina, Etossuximida, Lamotrigina, Fenobarbital, Topiramato e V
- Exatidão e precisão sólidas e satisfatórias foram observadas para amostras de pacientes com epilepsia coletadas em dispositivos Mitra-VAMS® e foram consideradas confiáveis para a quantificação de PER no fluido oral.
- A saliva foi facilmente coletada nos dispositivos Mitra-VAMS®.
- Os dados de estabilidade destacaram os benefícios dessa abordagem como uma estratégia alternativa para apoiar pacientes com epilepsia, simplificando a coleta de amostras.
- A amostragem de fluidos orais usando a Tecnologia VAMS® também pode ser eficaz para outros medicamentos antiepilépticos; no entanto, mais estudos precisariam ser realizados para validar a abordagem desses medicamentos.
Considerações finais sobre microamostragem de saliva
À medida que a instrumentação LC-MS/MS continua a melhorar em termos de sensibilidade e especificidade, o acoplamento com microamostras retiradas de fluidos alternativos fornece um novo caminho intrigante para a análise de fármacos e biomarcadores. A natureza não invasiva da coleta de amostras de saliva é uma opção atraente e um biofluido importante a ser considerado para análises futuras. Além disso, se mais estudos mostrarem evidências corroborativas de boa correlação entre os níveis séricos e salivares, a saliva poderá desempenhar um papel ainda maior no TDM no futuro.
Além disso, o acoplamento de estudos LC-MS/MS a auto-coleta usando dispositivos de matriz seca aumenta muito as opções que os pacientes e voluntários do estudo têm para fornecer amostras de alta qualidade ao laboratório para análise. Este estudo demonstra quão eficazes amostras de fluido oral (saliva) coletadas em dispositivos Mitra VAMS® podem ser para tais aplicações.
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