Dicas Para o Processo de Pré-tratamento de Amostras Sólidas
Antes da Extração em Fase Sólida
por Allcrom
A extração em Fase Sólida (SPE) é rotineiramente escolhida como uma técnica de preparação de amostra antes da análise de HPLC e GC. Ela proporciona limpeza, pré-concentração do analito e troca de solvente. Isso funciona bem para amostras líquidas homogêneas, mas claramente uma amostra sólida não pode ser aplicada diretamente em um dispositivo SPE. Aqui, exploraremos a abordagem mais adequada para o pré-tratamento de amostras sólidas antes da extração em Fase Sólida (SPE).
A primeira etapa do processo de pré-tratamento da amostra sólida envolve a homogeneização da amostra com um solvente adequado. O solvente selecionado para esse propósito deve:
- Ser eficaz na Solubilização do Analito.
- Ser eficaz na solubilização da matriz da amostra, embora isso não seja necessário, desde que a amostra seja bem misturada com o solvente.
- Idealmente, deverá ser um solvente fraco quando se trata da etapa de SPE. Isso pode não ser possível, sendo necessário secar e reconstituir a amostra antes de carregá-la no cartucho de SPE.
Tendo formado uma suspensão da amostra em um solvente adequado, a amostra deve ser agitada vigorosamente para promover uma mistura completa, e depois centrifugada para precipitar os componentes insolúveis da matriz. O solvente deve então ser removido para tratamento adicional.
Agora, é necessário selecionar o mecanismo de retenção (consulte a tabela a seguir para referência):
| Mecanismo de Retenção | Solvente Fraco | Solvente Forte |
|---|---|---|
| Fase Reversa | Água / Tampão | Acetonitrila/Metanol (Hexano mais forte) |
| Fase Normal | Hexano / Heptano | Orgânicos de Polaridade média
como DCM, MTBE, IPA (o mais forte é a água) |
| Troca Iônica | Tampão Aquoso em um pH que promova interações de troca Iônica entre o Analito e o Adsorvente SPE | Solvente Orgânico, normalmente metanol com ajuste de pH para impedir interações de Troca Iônica |
As propriedades do Analito e do Diluente da amostra precisam ser consideradas. As extrações em Fase Reversa são eficazes para analitos moderadamente polares a moderadamente hidrofóbicos, mas somente se eles estiverem dissolvidos em um Solvente Fraco, como a água. Se a amostra for dissolvida em um solvente de polaridade média, a amostra precisará ser diluída ou, alternativamente, seca e reconstituída. O mesmo se aplica à fase normal, em que as amostras precisam ser dissolvidas em Hexano/Heptano para que os Analitos sejam retidos com sucesso durante o carregamento da amostra no dispositivo de SPE.
Os exemplos a seguir ajudarão a ilustrar este conceito com mais clareza.
A Extração de PCBs do Solo
Os PCBs são hidrofóbicos e se dissolverão facilmente em um solvente não polar. O solo pode ser seco, pesado e depois extraído usando hexano (ou heptano). Uma vez que a solução resultante esteja completamente misturada e centrifugada, ela pode ser aplicada diretamente a um cartucho SPE de fase sílica já condicionado, permitindo a realização de uma extração de fase normal.
Tilosina de Carne
A Tilosina é um antibiótico, com um logP de 1,0. A extração da carne com uma mistura de acetonitrila e água (80:20) quebrará quaisquer interações hidrofóbicas, liberando a Tilosina. Após a centrifugação, a amostra líquida resultante precisará de diluição adicional com água para reduzir a força do solvente de carregamento da amostra antes de uma extração de fase reversa.
Enilconazol de Laranjas
O Enilconazol é um fungicida amplamente utilizado na agricultura e frequentemente é utilizado em frutas cítricas. Ele pode ser facilmente extraído de laranjas usando Acetonitrila. Como o Enilconazol é básico, a adição de HCl (ácido clorídrico) ao extrato de Acetonitrila promoverá a protonação do analito, permitindo que ele seja retido diretamente em um material SPE de troca catiônica forte. Isso simplifica muito o processo de extração, pois não é necessária diluição da amostra (ao contrário da extração de fase reversa ou normal, onde 100% de Acetonitrila causaria a não retenção do analito durante o carregamento da amostra).