Guia de Cuidados com a Coluna: Como Limpar uma Coluna HPLC usando Fluxo Invertido
O cuidado com a Coluna é excepcionalmente importante em um laboratório, no entanto, se não for feito corretamente, pode afetar a integridade da Coluna. Limpar a Coluna HPLC pode ser simples, mas é excepcionalmente importante para a eficiência, vida útil e produtividade do equipamento. Uma Coluna HPLC ineficaz pode afetar sua análise, levando a resultados imprecisos, o que significa mais tempo gasto no mesmo projeto.
O vídeo a seguir se concentra exclusivamente em como limpar a Coluna HPLC por fluxo invertido. Pode ser o momento de limpar a Coluna HPLC quando perceber alta contrapressão, baixa eficiência, picos divididos ou o problema mais comum, acúmulo de partículas na entrada da Coluna.
O fluxo invertido ajuda com todos esses problemas, especialmente com o acúmulo de partículas. Para limpar uma Coluna, basta seguir as etapas abaixo:
- Pegue a Coluna e veja qual a direção atual do fluxo.
- Vá na direção oposta à metade da fluxo tradicional, que está sendo executada atualmente na Coluna.
- Depois que a Coluna é invertida e instalada em uma extremidade, é possível começar a operar o sistema com a solução de limpeza.
- As partículas que estiverem na Coluna serão eliminadas e capturadas por um béquer e não no detector. Faça isso por cerca de 15 a 20 minutos.
- Depois de terminar, volte a Coluna para o fluxo correto, instale a Coluna e faça uma análise da mistura de teste prodigy (também conhecida como PTM) para confirmar se a eficiência e a pressão estão de volta às condições normais.
Assista ao vídeo abaixo para ver a demonstração completa ou confira no YouTube:
Se tiver mais perguntas sobre como cuidar melhor da sua Coluna, como fazer uma análise ou qualquer outra coisa relacionada ao trabalho, a Allcrom oferece um serviço técnico gratuito através do bate-papo, que permite que você fale com especialistas.
Para saber mais sobre limitações de fase móvel, dicas de armazenamento de Coluna e acessórios para proteção de Coluna, baixe aqui o Guia de cuidados com a Coluna HPLC.
O guia é o vídeo ou possui um pdf? Se for não encontrei o link.
Olá Kaisa, bom dia!
O guia é o passo a passo descrito no texto e também exemplificado no vídeo. Se tiver alguma dúvida que não esteja neste material, pode acessar o chat para suporte técnico. Estamos à disposição!
Olá
Podem partilhar qual a sequência dos solventes na lavagem usadas para lavagem reversa da coluna cromatografica?
Olá Martinho,
Muito obrigada pelo contato. Abaixo segue um resumo, mas é importante estar ciente que para este tema as informações que precisam ser confirmadas e que necessitam de atenção individual.
Resumo:
1- O primeiro passo para se realizar uma limpeza no sentido invertido seria confirmar com o fabricante de sua coluna a possibilidade de invertê-la;
As colunas da marca Phenomenex podem ser invertidas para realizar a limpeza, exceto as Kinetex com partículas de 1,3µm. Não recomendamos que inverta a coluna de outros fabricantes antes de receber a confirmação/autorização.
2- Após a confirmação e autorização, verifique se os solventes utilizados são compatíveis com o de armazenamento/último uso da coluna e o último utilizado no cromatógrafo;
3- Remova o sistema de pré-colunas, inverta o sentido da coluna e conecte ao equipamento. Inicie com fluxo baixo e aumente gradativamente até metade do fluxo normalmente utilizado;
4- Siga com os volumes de coluna e sequência de solventes adequados;
Para calcular o volume de coluna, utilize a fórmula abaixo:
Vc = 0,6 x π x ((DI / 2)2) x L
DI= Diâmetro Interno da coluna, em cm
L= Comprimento da coluna, em cm
Por exemplo: 1 volume de coluna para 100×4,6mm é aproximadamente 1,0mL.
Para uma coluna utilizada em fase reversa (C18 (ODS), EVO-C18, XB-C18, C12, C8, C5, C4, C2, C1, Biphenyl, Phenyl-Hexyl, F5, PFP):
Percole de 10 a 20 volumes de colunas de cada passo:
1- 5:95 Acetonitrila/Água (ou Metanol/Água) para remoção do tampão
2- 95:5 Acetonitrila/Água (ou Metanol/Água)
3- Isopropanol
4- 95:5 Acetonitrila/Água (ou Metanol/Água)
5- 5:95 Acetonitrila/Água (ou Metanol/Água)
6- Equilibrar com a fase móvel ou com ~60:40 Acetonitrila/Água para armazenamento
A sequência de solventes acima é somente para colunas de fase reversa. Para outros modos de separação, verifique qual seria a sequência de solventes adequada.
Bom dia, você poderia informar o passo a passo para fazer o teste prodigy ?
Olá Jeanne, bom dia!
O padrão Mix de Teste Prodigy (PTM – Prodigy Test Mix, do inglês), AL0-3045, é o padrão utilizado no teste com a maioria das colunas de fase reversa da Phenomenex. O resultado/cromatograma é o certificado de análise que é enviado junto com a coluna. Esse padrão possui os compostos uracila, acetofenona, tolueno e naftaleno. As diferentes características permitem avaliação de desempenho da coluna, como por exemplo: volume morto, hidrofobicidade, assimetria… e, se os resultados forem satisfatórios, a coluna recebe aprovação do controle de qualidade da Phenomenex e está disponível para venda.
O padrão (ref. AL0-3045) está disponível para venda e, se desejar, podemos enviar uma cotação para avaliação (por gentileza, deixe seus contatos no chat que solicitamos o envio).
Sobre o uso: se deseja utilizar em uma coluna Phenomenex (fase reversa), deve seguir as mesmas condições do certificado de análise, proporção da fase móvel, temperatura, fluxo… para avaliação. Caso não seja Phenomenex, nos envie as informações da coluna que retornamos com uma sugestão para as condições cromatográficas
O ideal é utilizar um fluxo mínimo (0,1 ou 0,2 mL/min, no máximo) para fazer esta limpeza, exclusivamente com solvente orgânico (metanol ou acetonitrila). Em geral pode-se deixar este baixo fluxo durante 1 h.
Eu recentemente recuperei uma coluna com fase estacionária pentafluorofenila utilizando este procedimento.
gostei muito do site parabéns 🙂