Dica Técnica: Precipitação de Proteínas
Os Cientistas não são perfeitos. Ninguém é. Acompanhe nossas Dicas Técnicas no Blog, para resolvermos seus problemas mais debilitantes, da mecânica à metodologia, juntos.
Embora as Proteínas sejam Solvatadas em Soluções aquosas por meio de interações Polares com Moléculas de Água, as amostras Proteicas, como o plasma, são frequentemente analisadas quanto a fármacos moleculares pequenos e os metabólitos correspondentes por meio de uma técnica conhecida como Precipitação de Proteínas (PPT).
A PPT é útil para limpar vários tipos de matrizes em indústrias como Alimentos, Bebidas, Bioanalíticas e muito mais. Pode ser realizada com um Solvente Orgânico, Ácidos fortes ou Sais, forçando as Proteínas a desnaturar e se associar a outras em vez de permanecer na solução.
A precipitação e aglutinação de Proteínas é útil para remover seletivamente Proteínas de uma Amostra ou reduzir a interação de Moléculas pequenas do Analito com uma Proteína de ligante no plasma, como a vitamina D, por exemplo.
Diferentes espécies de Plasma, de cães, ratos, humanos e macacos, são frequentemente analisadas por empresas farmacêuticas via PPT somente ou com uma combinação de PPT e Extração de Fase Sólida (Solid Phase Extraction, SPE) antes da técnica Analítica.
Embora a PPT seja menos seletiva para limpeza e exija diluição da Amostra, ela também é mais simples, mais barata e mais rápida do que a técnica SPE.
Agora, vamos falar de Métodos.
Resumo do Método de PPT
Agente Precipitante Orgânico:
- Ideal para SPE de Troca de Iônica; não requer nenhuma diluição normalmente.
- Próprio para SPE Neutro; a diluição é necessária para reduzir a força Orgânica antes de carregar em SPE.
Melhor Solvente: Acetonitrila
- Adicione uma proporção ≥ 2:1 do agente precipitante em relação à Amostra de Plasma.
- Agite para que a Proteína se desprenda da Solução; centrifugue para sedimentar e remover o sobrenadante para Análise ou use uma placa de filtro de alto rendimento.
Agente Precipitante Aquoso:
- Ideal para SPE neutro
- Próprio para SPE de Troca Iônica; ajuste de pH ou Sal necessário antes de carregar em SPE.
Melhor Solvente: 20% Ácido Tricloroacético (ATA) em Água.
- Adicione uma proporção ≥ 2:1 do agente precipitante em relação à Amostra de Plasma.
- Agite para que a Proteína se desprenda da Solução; centrifugue para sedimentar e remover o sobrenadante para Análise ou use uma placa de filtro de alto rendimento.
Solvente Bônus: Sulfato de Zinco.
- Adicione uma proporção ≥ 2:1 do agente precipitante em relação à Amostra de Plasma.
- Agite para que a Proteína se desprenda da Solução; centrifugue para sedimentar e remover o sobrenadante para Análise ou use uma placa de filtro de alto rendimento.