Vida Útil da Coluna HPLC
Como Saber Quando é a Hora de Dizer Adeus?
Autora convidada – Dra. Helen Whitby, Especialista Técnica
Deixar de lado sua Coluna favorita pode ser difícil, então quando é realmente hora de dizer adeus? Abaixo estão alguns dos sinais que você deve observar quando a vida útil da sua Coluna de HPLC está chegando ao fim.
- Pressão alta que não diminui mesmo depois da limpeza da coluna
- Picos Divididos
- Perda de Resolução
- Alargamento do pico
- Variação no tempo de retenção
Alta Pressão:
Os aumentos na pressão são geralmente o resultado da obstrução no frit de entrada da Coluna HPLC. Para remover a obstrução, na maioria das situações, é possível inverter o fluxo do solvente pela Coluna a uma taxa de fluxo reduzida e deixar passar 100% do solvente forte pela Coluna. Se a pressão não voltar ao normal, o frit está com uma obstrução irreversível ou há um espaço vazio no leito da Coluna. As duas situações exigem que a Coluna seja substituída.
Picos Divididos:
Muitos picos divididos também são o resultado de um frit obstruído na entrada da Coluna, o que resulta em uma injeção canalizada. Para resolver isso, primeiro siga as etapas descritas acima. Se o pico dividido permanecer, a causa provável são as condições de funcionamento inadequadas da metodologia (trabalhar muito próximo ao pKa do composto ou usar um solvente de injeção forte) ou a Coluna pode estar comprometida com contaminantes fortemente retidos. Se a entrada estiver irreversivelmente obstruída ou a fase estacionária estiver contaminada será necessário substituir a Coluna.
Perda de Resolução:
As Colunas HPLC são itens consumíveis e, como tal, ao longo do tempo, você começará a perder a resolução dos seus pares críticos. Pode ser possível a regeneração de algumas Colunas e cada Coluna terá seu próprio protocolo individual para isso, no entanto, depois que a perda de resolução foi comprometida em um par crítico de compostos e não pode ser regenerada, sua Coluna chegou ao fim de vida natural para a análise específica que você está fazendo.
Alargamento do pico:
Alguns alargamento do pico podem ocorrer por motivos diferentes do fim natural da vida útil de uma Coluna, incluindo: sobrecarga de injeção, tamponamento inadequado, condições inadequadas do método e solventes fortes de injeção. No entanto, se esses elementos foram eliminados, o alargamento do pico é um sinal de que a Coluna está envelhecendo. Depois que o perfil cromatográfico deteriorou ao ponto de você não conseguir mais atender a adequação do sistema ou resolver pares críticos, é hora de dizer adeus.
Variação no tempo de retenção:
Na maioria das vezes, as variações no tempo de retenção são os resultados de um controle deficiente do método, porém, em caso de contaminação de fase, notará variações no tempo de retenção dos picos, se a sua fase estiver ficando suja. Nem todos os picos serão afetados igualmente e, se você já tiver eliminado todas dúvidas em relação ao método para solução de problemas, a causa provável que sobrará será a contaminação da fase estacionária e sua coluna precisará ser descartada.
Para ter certeza de que a coluna é o problema, existem coisas que você pode testar:
- Limpe a Coluna seguindo as recomendações do fornecedor. Cada Coluna tem um guia individual, mas um guia geral para a maioria das Colunas pode ser encontrado clicando aqui.
- Teste o desempenho da Coluna com a mesma solução teste indicada no certificado de qualidade da Coluna. Isso informará como a seletividade mudou desde que você começou a usar.
- Verifique a data em que recebeu a Coluna. É provável que, se ela estiver em seu laboratório desde 2008, seja o momento de atualizar para um modelo mais novo.
Todos esses pontos para solução de problemas são discutidos mais detalhadamente em nosso Guia de Solução de Problemas em HPLC.
Para mais informações sobre como cuidar melhor da sua Coluna, como fazer uma análise ou qualquer outra coisa relacionada ao trabalho, a Allcrom oferece um serviço técnico gratuito através do chat, que permite que você fale com especialistas.