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Colunas Aeris™ WIDEPORE para Separações de
Proteínas e Polipeptídeos Intactos
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As colunas Aeris WIDEPORE são empacotadas com partículas core-shell de 3,6 µm que são especialmente projetadas com uma camada fina porosa, poros grandes e química de superfície XB estericamente protegida, que visa os desafios inerentes da separação de proteínas e peptídeos. Essa
combinação única de características resulta em pressões de trabalho baixas, altas taxas de difusão de difusão e excelente seletividade, gerando uma resolução cromatográfica excepcional tanto nos sistemas de HPLC como nos de UHPLC. |
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Recomendada para...
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Caracterização estrutural de Proteínas
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Ensaios indicadores de estabilidade
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Identificação de modificação pós-traducionais
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Proteínas PEGladas, anticorpos, biogenéricos, etc.
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Perfil de impurezas
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Mapeamento de peptídeos
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Partícula Core-Shell de 3,6 µm
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Fácil Desenvolvimento de Método com três Seletividades
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Fases Estacionárias da Aeris™ WIDEPORE Core-Shell de 3,6 µm:
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XB-C18
Máxima Hidrofobicidade recomendada para:
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Proteínas
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Proteínas Hidrofílicas
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| • |
Proteínas PEGladas
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| • |
Separações em temperatura alta
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| • |
Seletividade alternativa para
mapeamento de peptídeos
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XB-C8
Média Hidrofobicidade
recomendada para:
| • |
Proteínas grandes
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| • |
Proteínas moderadamente
hidrofóbicas
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| • |
Anticorpos monoclonais
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| • |
Proteínas glicosiladas
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| • |
Separações em temperatura alta
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C4
Baixa hidrofobicidade
recomendada para:
| • |
Proteínas muito grandes
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| • |
Proteínas muito hidrofóbicas
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| • |
Proteínas de membrana
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Proteínas de menor retenção
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Fácil Desenvolvimento de Método com três Seletividades
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Como as condições de separação ideais são diferentes para cada amostra, nós sugerimos avaliar todas as três químicas de superfície para descobrir a mais adequada para sua separação. Uma vez que uma fase é selecionada, o método pode ser otimizado futuramente com ajustes na fase móvel, no fluxo, no gradiente ou na dimensão de coluna (comprimento, diâmetro interno).
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Diferenças de Seletividade de Fase Aeris
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Condições para todas as colunas:
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Coluna:
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Aeris WIDEPORE 3,6 µm (como mostrado)
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Temperatura:
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40 ºC
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Dimensões:
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100 x 4,6 mm
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Volume de injeção:
|
10 µL |
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Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
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Detecção:
|
UV em 214 nm
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B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
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Amostra:
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Lisozima
(1 mg/mL)
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Gradiente:
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A/B (97: 3) por 3 min para A/B (35: 65)
em 20 min
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Fluxo:
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1,5 mL/min
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Maximize o Poder de Resolução do HPLC e UHPLC
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com a exclusiva Partícula Core-Shell de 3,6 µm
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A tecnologia Core-Shell de 3,6 µm combinada com as químicas de superfície inertes e as especificações ideais de empacotamento resultam em colunas Aeris WIDEPORE que oferecem um poder de resolução excepcional com pressões de trabalho significativamente mais baixas. Agora, os analistas têm a capacidade de gerar resultados de qualidade superior em relação aos que geralmente são produzidos pelas colunas empacotadas com partículas totalmente porosas para cada análise de proteínas, nos sistemas de HPLC ou UHPLC.
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Desempenho Equivalente ao da Partícula Sub-2 µm em Pressão de Trabalho Menor
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*Waters® ACQUITY® BEH™ 300
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Aeris WIDEPORE
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C18 de 1,7 µm
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XB-C18 de 3,6 µm
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Condições para ambas as colunas:
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Coluna:
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ACQUITY®BEH™ 300 C18 de 1,7 µm
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Temperatura:
|
40 ºC
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Aeris WIDEPORE XB-C18 de 3,6 µm |
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Volume de injeção:
|
10 µL
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Dimensões:
|
150 x 2,1 mm
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Detecção:
|
UV em 214 nm (Ambiente)
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Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
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Amostra:
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Fator de Crescimento Epidérmico
Humano
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B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
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(EGF - Epidermal Growth Factor)
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Gradiente:
|
A/B (97: 3) para A/B (35:65) em 45 min
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Fluxo:
|
0,3 mL/min
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Aumente o Comprimento da Coluna Para Melhorar o Poder de Resolução
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150 x 2,1 mm
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|
250 x 2,1 mm
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Aeris WIDEPORE
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|
Aeris WIDEPORE
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|
XB-C18 de 3,6 µm
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|
XB-C18 3,6 µm
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Comprimento de 150 mm
Área ampliada
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Comprimento de 250 mm
Área Ampliada
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Condições para ambas as colunas:
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Coluna:
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Aeris WIDEPORE XB-C18 de 3,6 µm
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Dimensões:
|
conforme mostrado
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Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (97: 3) por 3 min para A/B (35: 65) em 30 min |
|
Fluxo:
|
0,3 mL/min
|
|
Temperatura:
|
40 ºC
|
|
Volume de injeção:
|
25 µL
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Detecção:
|
UV em 214 nm (Ambiente)
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Amostra:
|
Digestão de BSA (Albumina do Soro Bovino)
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Aplicações Caracterização de Proteína Intacta
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Caracterização Biogenérica
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Redução de Proteína
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| Coluna: |
Aeris™ WIDEPORE XB-C18 de 3,6µm
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Dimensões:
|
150 x 4,6 mm
|
|
Referência:
|
00F-4481-E0
|
|
Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (70: 30) para A/B (35: 65)
em 30 min
|
|
Fluxo:
|
1,0 mL/min
|
|
Temperatura:
|
22 ºC |
|
Volume de injeção:
|
5 µL |
|
Detecção:
|
UV em 214 nm
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Amostra:
|
Interferon alfa-2a
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Coluna:
|
Aeris WIDEPORE C4 de 3,6 µm
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|
Dimensões:
|
150 x 4,6 mm
|
|
Referência:
|
00F-4505-E0
|
|
Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (97: 3) por 3 min para A/B (35: 65) em 30 min
|
|
Fluxo:
|
1,2 mL/min |
|
Temperatura:
|
22 ºC
|
|
Volume de injeção:
|
20 µL
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Detecção:
|
UV em 214 nm (Ambiente)
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Amostra:
|
Sujeita a RNAse para redução
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| |
100% intacta
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Reduzida em 20%
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Reduzida em 40%
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| |
Reduzida em 60%
|
| |
Reduzida em 100%
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j |
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Aplicações Separação de Anticorpo Monoclonal Intacto (mAb)
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mAb Humano
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|
Variantes de mAb recortadas
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Coluna:
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Aeris WIDEPORE XB-C18 de 3,6 µm
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Dimensões:
|
50 x 2,1 mm
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Referência:
|
00B-4482-AN |
|
Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % de Ácido fórmico
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1 % de Ácido fórmico
|
|
Gradiente:
|
A/B (90: 10) para A/B (10: 90) em 6 min
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Etapa No.
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Tempo
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%A
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%B
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|
(mín.)
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1
|
0
|
90
|
10
|
| |
2
|
0.7
|
66
|
34 |
| |
3
|
5
|
55
|
45 |
| |
4
|
6
|
10
|
90
|
|
Fluxo:
|
0,5 mL/min
|
|
Temperatura:
|
22 ºC
|
|
Detecção:
|
UV em 214
|
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Amostra:
|
Anticorpo monoclonal
|
|
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|
Coluna:
|
Aeris WIDEPORE XB-C18 de 3,6 µm
|
|
Dimensões:
|
250 x 4,6 mm
|
|
Referência:
|
00G-4482-E0
|
|
Fase móvel:
|
A: Água com 0,1% TFA
|
| |
B: Acetonitrila/IPA (50:50)
com 0,1% TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (90: 10) para A/B (35: 65)
em 60 min
|
|
Fluxo:
|
1,0 mL/min
|
|
Temperatura:
|
22 ºC
|
|
Volume de injeção:
|
25 µL
|
|
Detecção:
|
UV em 214 nm (Ambiente)
|
|
Amostra:
|
Anticorpo monoclonal do próprio
cliente com
|
| |
variantes de mAb recortadas
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|
Aplicações Análise de Modificação Pós-Translacional
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|
Oxidação
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Desaminação
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Coluna:
|
Aeris™ WIDEPORE XB-C18 de 3,6 µm
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Dimensões:
|
100 x 4,6mm
|
|
Referência:
|
00D-4482-E0
|
|
Fase móvel:
|
A: Água com 0,1% TFA
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1% TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (97: 3) por 3 min para A/B (15: 85)
em 45 min
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Fluxo:
|
1,2 mL/min
|
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Temperatura:
|
22 ºC
|
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Volume de injeção:
|
50 µL
|
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Detecção:
|
UV em 214 nm
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Amostra:
|
Insulina oxidada usando 3 % de peróxido
de hidrogênio.
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Aplicações Mapeamento de Peptídeos
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Mapeamento de Albumina do Soro Bovino digerida por Tripsina
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Digestão de Apomioglobina
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Coluna:
|
Aeris WIDEPORE
XB-C18 de 3,6 µm
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|
Dimensões:
|
250 x 2,1 mm
|
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Referência:
|
00G-4282-AN
|
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Fase móvel:
|
A: Água com 0,1 % TFA
|
| |
B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
|
|
Gradiente:
|
A/B (97: 3) por 3 min para
A/B (35: 65) em 47 min
|
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Fluxo:
|
0,3 mL/min
|
|
Temperatura:
|
40 ºC
|
|
Volume de injeção:
|
10 µL
|
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Detecção:
|
UV em 214 nm
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Amostra:
|
Digestão de Albumina de Soro Bovino
(BSA) com Tripsina
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Coluna:
|
Aeris WIDEPORE
XB-C18 de 3,6µm
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Dimensões:
|
150 x 4,6 mm
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Referência:
|
00F-4282-E0
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Fase móvel:
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A: Água com 0,1 % TFA
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B: Acetonitrila com 0,1 % TFA
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Gradiente:
|
A/B (97: 3) por 3 min para
A/B (35: 65) em 30 min
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Fluxo:
|
1,5 mL/min
|
|
Temperatura:
|
22 ºC
|
|
Volume de injeção:
|
20 µL
|
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Detecção:
|
UV em 214 nm
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Amostra:
|
Digestão de apomioglobina
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Estudo realizado usando colunas novas e, até onde possível, condições experimentais idênticas foram aplicadas. As comparações das separações podem não ser representativas para todas as aplicações.
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